Smjernice za odmrzavanje stanica
- Brzo odmrznite smrznute stanice (< 1 minuta) u vodenoj kupelji na 37°C.
- Polagano razrijedite odmrznute stanice prije nego što ih inkubirate, koristeći prethodno zagrijani medij za rast.
- Na pločici su odmrznute stanice visoke gustoće radi optimizacije oporavka.
- Uvijek koristite odgovarajuću aseptičku tehniku i radite u haubi s laminarnim protokom.
Zašto se vrši odmrzavanje stanica?
Od vitalnog je značaja pravilno odmrznuti stanice kako bi se održala održivost kulture i omogućilo brži oporavak kulture. Neki krioprotektori, kao što je DMSO, otrovni su iznad 4 °C. Stoga je bitno da se kulture brzo odmrznu i razrijede u mediju za kulturu kako bi se minimizirali toksični učinci.
Kakav je proces odmrzavanja?
Odmrzavanje je proces odvođenja smrznutog proizvoda iz zamrznutog na temperaturu (obično iznad 0°C) na kojoj nema ostatka leda, tj. "odmrzavanje". Odmrzavanje se često smatra jednostavno preokretom procesa smrzavanja.
Koji je najbolji način za zamrzavanje stanica?
Polagano zamrznite stanice snižavanjem temperature na približno 1°C u minuti pomoću krio-zamrzivača s kontroliranom brzinom ili posude za krio-zamrzavanje kao što je “Mr. Frosty”, dostupan u laboratoriju Thermo Scientific Nalgene (Nalge Nunc). Uvijek koristite preporučeni medij za zamrzavanje.
Kako odmrznuti primarnu ćeliju?
Obrišite vanjsku stranu bočice stanica sa 70% etanolom ili izopropanolom. U ormariću za biosigurnost, zakrenite poklopac za četvrtinu okreta kako biste oslobodili unutarnji tlak, a zatim ga ponovno zategnite. Brzo odmrznite stanice u vodenoj kupelji od 37°C laganim vrtjenjem bočice. Uklonite bočicu kada ostane mala količina leda.