Slijedi pregled različitih koraka protokola neizravne imunofluorescencije bojenja
- Planiranje eksperimenta i priprema uzoraka. …
- Pričvršćivanje uzorka. …
- Permeabilizacija stanica. …
- Blokiranje. …
- Primarna inkubacija antitijela. …
- Inkubacija sekundarnog antitijela. …
- Protuboj i montaža.
Kako izvodite imunofluorescenciju?
Svi koraci inkubacije odvijaju se na sobnoj temperaturi
- Operite stanice dvaput i pincetom pažljivo stavite pokrovno staklo s prevrnutim stanicama u vlažnu komoru.
- Popravite s 4% formaldehida 10 minuta i operite 3 ×.
- Permeabilizirajte s 0,1 % TX-100/PBS 15-20 minuta i operite 3 ×.
Kako se koristi imunofluorescencija u stanici?
Protokol imunofluorescencije za adherentne stanice
- Sjeme 1–1,5 x104 stanica po jažici stakalca s 4 komore u 500 mL medija kulture. Inkubirajte na 37°C pri 5% CO2.
- 32-36 sati nakon zasijavanja stanica, uklonite medij stanične kulture i isperite stanice 3 puta koristeći 500 µL 1X PBS-a.
Što je primjer imunofluorescencije?
Na primjer, istraživač bi mogao stvoriti primarna antitijela u kozi koja prepoznaju nekoliko antigena, a zatim koristiti bojom spojena zečja sekundarna antitijela koja prepoznaju konstantnu regiju kozjih antitijela (" zečja anti-koza" antitijela).
Koja je upotreba imunofluorescentnog bojenja?
Imunofluorescentno (IF) bojenje je široko korištena tehnika u biološkim istraživanjima i kliničkoj dijagnostici IF koristi fluorescentno obilježena antitijela za otkrivanje specifičnih ciljnih antigena. Nakon toga slijedi slikanje, to je vrlo izravna tehnika jer nešto možete vidjeti.
