Ako vaš protein nije iste veličine kao vaše antitijelo, možete eluirati s 0,1M glicinom, pH2-3, a zatim odvojiti protein od interesa od antitijela pomoću SEC-a (kao superdex 200).
Što je eluiranje proteina?
Proteini se eluiraju gradijentom sve veće količine organskog otapala, kao što je acetonitril. Proteini se eluiraju prema njihovoj hidrofobnosti. Nakon pročišćavanja HPLC-om protein je u otopini koja sadrži samo hlapljive spojeve i može se lako liofilizirati.
Zašto proteini imaju nisku pH vrijednost?
Upotreba pufera niskog pH za eluiranje iz proteina A poznato je da doprinosi agregaciji proizvoda Ipak, ograničeniji skup dokaza sugerira da niski pH možda nije jedini uzrok agregacije u protein A kromatografiji, umjesto toga, drugi aspekti procesa mogu značajno doprinijeti.
Kako se vrši eluiranje?
U analitičkoj i organskoj kemiji, eluiranje je proces izvlačenja jednog materijala iz drugog ispiranjem s otapalom; kao kod pranja napunjenih smola za ionsku izmjenu radi uklanjanja zarobljenih iona. … Nakon što molekule otapala istisnu analit, analit se može izvesti iz kolone radi analize.
Koliko antitijela trebate za Coip?
Za rutinske Co-IP eksperimente, antitijelo koje sam koristio je ne više od 2ug (U mom setu, 1,4 -2,0 ug antitijela dovoljno je za hvatanje 2500-5000 ug proteinski lizat.) Ali još uvijek ovisi o razinama ekspresije vaših ciljnih proteina u vašim uzorcima, pa ćete vjerojatno morati napraviti neke izmjene.
