Da bi se pigmenti mogli izvući, kloroplasti su suspendirani u izolacijskom puferu. Da bismo mogli izvući pigmente iz kloroplasta, prvo se moramo riješiti pufera. Koji je najbolji način za odvajanje kloroplasta od pufera? koristite centrifugu za odvajanje
Kako izolirati kloroplast?
U metodi izolacije kloroplasta, stanična stijenka se razbija mehanički pomoću miješalice ili homogenizatora. Zatim se filtriranjem uklanjaju neprekinuto tkivo lista i stanični ostaci. Kloroplasti se skupljaju centrifugiranjem korištenjem gradijenta percoll.
Kako napraviti pufer za izolaciju kloroplasta?
Pripremite potrebnu količinu 1X pufera za izolaciju kloroplasta razrijedite 2X pufera 1:1 s dH2O vodom Dodajte 10 µL 10% otopine BSA po mL 1X kloroplasta Izolacijski pufer. Neposredno prije upotrebe dodajte 1 µL DTT-a na 1 mL pufera za izolaciju kloroplasta. Označite ovaj međuspremnik kao "Kompletni međuspremnik ".
Što je u puferu za izolaciju kloroplasta?
DNA izolacijski pufer se sastojao od 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA i 1 mM DTT Liza kloroplasta dobivena je inkubacijom peleta kloroplasta s 8 ml pufera za izolaciju DNA, 1,5 ml 20% SDS, 20 µl 2-merkaptoetanola i 30 µl proteinaze K (10 mg/ml) u epruvetu za centrifugiranje na 55°C tijekom 4 h.
Koji je pH pufera koji se koristi za homogenizaciju lista špinata u protokolu izolacije kloroplasta?
Špinat je pun dobrih kloroplasta i oni se lako izoliraju. Listove ćete morati staviti u hladni blender s 0,1 M fosfatnog pufera, pH 7,5 i 0,5 M saharoze kako ne bi prsnuli.
